TaKaRa SPP System?冷休克表達載體 I
- 品名: TaKaRa SPP System?冷休克表達載體 I
- 品牌: TaKaRa
- 型號: 3367
- 產品詳情
- 規格參數
■ 制品內容 | |
SPP System Set (Code No.: 3366) | |
1. SPP System Set pCold I (SP-4) DNA、pCold II (SP-4) DNA pCold III (SP-4) DNA、pCold IV (SP-4) DNA | 各20 μg |
2. pMazF DNA (20 ng/μl) | 0.5 μg |
3. pCold I (SP-4) envZB DNA (20 ng/μl) | 0.2 μg |
SPP System I~IV (Code No.: 3367~3370) | |
1. pCold I~IV (SP-4) DNA中一個(0.5 μg/μl) | 20 μg |
2. pMazF DNA (20 ng/μl) | 0.5 μg |
3. pCold I (SP-4) envZB DNA (20 ng/μl) | 0.2 μg |
■ GenBank登錄 | |
Accession No. pCold I (SP-4) DNAAB248600 pCold II (SP-4) DNAAB248601 pCold III (SP-4) DNAAB248602 pCold IV (SP-4) DNAAB248603 ■ 鏈長 pCold I (SP-4) DNA4,407 bp pCold II (SP-4) DNA4,392 bp pCold III (SP-4) DNA4,377 bp pCold IV (SP-4) DNA4,359 bp | |
■ 制品說明 | |
根據美國新澤西州醫學與牙科大學的井上正順博士小組的研究,大腸桿菌的蛋白質MazF是一種能夠識別并切斷單鏈RNA特定序列 (ACA) 的核酸內切酶 (mRNA Interferase)。利用MazF可以抑制宿主蛋白質表達,只表達目的蛋白質。利用這一技術,開發了Single Protein Production (SPP) System。在SPP System中,在保持氨基酸序列不變的情況下用非ACA序列置換目的基因中的ACA序列,然后與MazF基因共表達。大部分宿主蛋白的mRNA因為有ACA序列而被MazF分解,表達被抑制,但是目的基因的轉錄mRNA中不含有ACA序列,不能被MazF切斷,從而使目的蛋白得到高效表達。由于目的蛋白質的不同,也有比單純使用冷休克表達載體進行表達時表達量低的情況。構建SPP系統,首先需要通過化學合成或點突變的方法制備無ACA序列的目的基因。設計無ACA基因的時候,在確保氨基酸序列不變的情況下將ACA序列替換,同時加入必須的酶切位點。其次,將無ACA基因克隆至含有無ACA轉錄區域的pCold (SP-4) 載體中。至此,用于目的片段的SPP系統表達的載體準備完畢,將其與能夠表達足量的MazF的pMazF載體共轉化至E.coli中,形成了目的片段的SPP。SPP System用的冷休克表達載體與pCold冷休克表達載體一樣,根據TEE序列、His tag和Factor Xa酶切位點序列有無,分成4個載體,分別是pCold I~IV (SP-4) DNA,pCold IV (SP-4)在多克隆位點的上游沒有附加的序列。 ■ 保存-20℃。 ■ 特長同位素標記方便:標記的目的蛋白質最大可達到宿主胞內新生蛋白質的90%。使用宿主廣泛:CspA啟動子來源于大腸桿菌,所以大部分的大腸桿菌都可作為宿主使用。因為共表達用載體pMazF DNA的篩選標記是氯霉素,所以具有氯霉素抗性的大腸桿菌 (例如:Rosseta等)不能作為宿主使用。 ■ 純度用于pCold (SP-4) DNA系列載體。1. 用雙脫氧測序法確認多克隆位點。2. 確認多克隆位點上的限制酶Nde I, Sac I, Kpn I, Xho I, BamH I, EcoR I, Hind III, Sal I, Pst I 和Xba I只有一個酶切位點。 | |
■ SPP System 原理圖 | |
■ SPP System冷休克表達載體圖譜 | |
TEE序列His tag序列Factor Xa切斷序列pCold I (SP-4) DNA○○○pCold Ⅱ (SP-4) DNA○○×pCold Ⅲ (SP-4) DNA○××pCold Ⅳ (SP-4) DNA××× | |
■ MazF表達質粒pMazF DNA載體圖譜 | |
SPPSystem?Set | |||
品牌 | CodeNo. | 產品名稱 | 包裝量 |
Takara | 3366 | SPPSystem?Set | 1Set |
Takara | 3367 | SPPSystem?I | 1Set |
Takara | 3368 | SPPSystem?II | 1Set |
Takara | 3369 | SPPSystem?III | 1Set |
Takara | 3370 | SPPSystem?IV | 1Set |
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