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            產品目錄

            TaKaRa SPP System?冷休克表達載體 II

            品名: TaKaRa SPP System?冷休克表達載體 II
            品牌: TaKaRa
            型號: 3368
            • 產品詳情
            • 規格參數
            ■ 制品內容
            SPP System Set (Code No.: 3366)
            1. SPP System Set
               pCold I (SP-4) DNA、pCold II (SP-4) DNA
               pCold III (SP-4) DNA、pCold IV (SP-4) DNA
            各20 μg
            2. pMazF DNA (20 ng/μl)0.5 μg
            3. pCold I (SP-4) envZB DNA (20 ng/μl)0.2 μg


            SPP System IIV (Code No.: 33673370)
            1. pCold IIV (SP-4) DNA中一個(0.5 μg/μl)20 μg
            2. pMazF DNA (20 ng/μl)0.5 μg
            3. pCold I (SP-4) envZB DNA (20 ng/μl)0.2 μg




            ■ GenBank登錄
                 Accession No.     pCold I (SP-4) DNAAB248600     pCold II (SP-4) DNAAB248601     pCold III (SP-4) DNAAB248602     pCold IV (SP-4) DNAAB248603 ■ 鏈長        pCold I (SP-4) DNA4,407 bp     pCold II (SP-4) DNA4,392 bp     pCold III (SP-4) DNA4,377 bp     pCold IV (SP-4) DNA4,359 bp

            ■ 制品說明
            根據美國新澤西州醫學與牙科大學的井上正順博士小組的研究,大腸桿菌的蛋白質MazF是一種能夠識別并切斷單鏈RNA特定序列 (ACA) 的核酸內切酶 (mRNA Interferase)。利用MazF可以抑制宿主蛋白質表達,只表達目的蛋白質。利用這一技術,開發了Single Protein Production (SPP) System。在SPP System中,在保持氨基酸序列不變的情況下用非ACA序列置換目的基因中的ACA序列,然后與MazF基因共表達。大部分宿主蛋白的mRNA因為有ACA序列而被MazF分解,表達被抑制,但是目的基因的轉錄mRNA中不含有ACA序列,不能被MazF切斷,從而使目的蛋白得到高效表達。由于目的蛋白質的不同,也有比單純使用冷休克表達載體進行表達時表達量低的情況。構建SPP系統,首先需要通過化學合成或點突變的方法制備無ACA序列的目的基因。設計無ACA基因的時候,在確保氨基酸序列不變的情況下將ACA序列替換,同時加入必須的酶切位點。其次,將無ACA基因克隆至含有無ACA轉錄區域的pCold (SP-4) 載體中。至此,用于目的片段的SPP系統表達的載體準備完畢,將其與能夠表達足量的MazF的pMazF載體共轉化至E.coli中,形成了目的片段的SPP。SPP System用的冷休克表達載體與pCold冷休克表達載體一樣,根據TEE序列、His tag和Factor Xa酶切位點序列有無,分成4個載體,分別是pCold I~IV (SP-4) DNA,pCold IV (SP-4)在多克隆位點的上游沒有附加的序列。 ■ 保存-20℃。 ■ 特長同位素標記方便:標記的目的蛋白質最大可達到宿主胞內新生蛋白質的90%。使用宿主廣泛:CspA啟動子來源于大腸桿菌,所以大部分的大腸桿菌都可作為宿主使用。因為共表達用載體pMazF DNA的篩選標記是氯霉素,所以具有氯霉素抗性的大腸桿菌 (例如:Rosseta等)不能作為宿主使用。 ■ 純度用于pCold (SP-4) DNA系列載體。1. 用雙脫氧測序法確認多克隆位點。2. 確認多克隆位點上的限制酶Nde I, Sac I, Kpn I, Xho I, BamH I, EcoR I, Hind III, Sal I, Pst I 和Xba I只有一個酶切位點。


            ■ SPP System 原理圖

            ■ SPP System冷休克表達載體圖譜
             TEE序列His tag序列Factor Xa切斷序列pCold I (SP-4) DNA○○○pCold Ⅱ (SP-4) DNA○○×pCold Ⅲ (SP-4) DNA○××pCold Ⅳ (SP-4) DNA×××


            ■ MazF表達質粒pMazF DNA載體圖譜

            SPPSystem?Set
            品牌CodeNo.產品名稱包裝量
            Takara3366SPPSystem?Set1Set
            Takara3367SPPSystem?I1Set
            Takara3368SPPSystem?II1Set
            Takara3369SPPSystem?III1Set
            Takara3370SPPSystem?IV1Set


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