| Chaperone Competent Cell BL21 Series是由五種分別轉化一種伴侶蛋白質粒 (Chaperone Plasmid Set (Code No.: 3340)) 的Escerichia coli BL21制成的感受態細胞。眾所周知，分子伴侶參與蛋白質折疊過程，且人們已經通過大量的實驗研究來表明體內蛋白折疊機理。 本制品中含有五種類型的質粒(pG-KJE8、pGro7、pKJE7、pG-Tf2、pTf16)，每一種質粒都是能有效表達一組協同作用、共同參與蛋白折疊的被稱作“Chaperone team”的分子伴侶。靶蛋白與其中一種“Chaperone team”共同表達，便可增加可溶性蛋白質的回收比率，而用通常方法，由于包涵體的形成，這些表達蛋白質常常是不可回收的。E.coli BL21來源于B株，為Lon蛋白水解酶、ompT外膜蛋白水解酶缺陷型。因此，表達的外源蛋白質在該體系中有更高的穩定性。當進行靶蛋白與“Chaperone team”共表達實驗時，通常需要三步：1. 用伴侶蛋白質粒轉化宿主E.coli； 2. 用轉化體制備感受態細胞；3. 用質粒轉化感受態細胞并表達靶蛋白。如果使用本產品，只需一步轉化就可構建靶蛋白與“Chaperone team”的共表達體系，因為使用的E.coli BL21感受態細胞已轉化有一種伴侶蛋白質粒。另外，此感受態細胞有五種質粒，不含有伴侶蛋白質粒的TaKaRa Competent BL21也可作為對照。每種E.coli BL21感受態細胞包括一種伴侶蛋白質粒，非常適合pCold DNA系列的表達。但該產品不適合于啟動子為T7的蛋白質表達體系，如pET系列，因為，宿主E.coli BL21菌株不表達T7 RNA聚合酶。注意：本產品不可用于電擊法轉化。 ■ DNA序列 pG-KJE8 DNA (Fasta形式的txt文件) pGRO7 DNA (Fasta形式的txt文件) pG-TF2 DNA (Fasta形式的txt文件) pKJE7 DNA (Fasta形式的txt文件) pTf16 DNA (Fasta形式的txt文件) ■ 保存-80℃。注意：如果不是-80℃保存，轉化效率將會降低。此時，可在使用前用附帶的pUC19做轉化實驗，確認轉化效率。不能保存在液氮中。 ■ 轉化效率Chaperone competent cells：轉化1 ng pUC19，涂于Cm+和Amp+平板上進行篩選。TaKaRa competent cell BL21：轉化1 ng pUC19，涂于Amp+平板上進行篩選。轉化效率≥1×106 cfu/μg pUC19 ■ GenotypeE.coli BL21 : F-, ompT, hsdSB (rB-mB-), gal, dcm ■ 注意事項1. 從-80℃中只取出實驗所用的感受態細胞，然后立即放入干冰/EtOH bath。開始實驗前不要取出。2. 可使用1.5 ml microtube替代FALCON tube，但可能會降低效率。3. 使用100 μl感受態細胞轉化時，高純度DNA使用量不要超過10 ng，否則轉化效率會降低。4. 轉化體系改變 (如感受態細胞使用量發生改變) ,或換用了其它tube等，需研討轉化條件 (如使用一般的1.5 ml tube時，請于42℃保溫60秒)。5. 除SOC培養基外，L-broth及φb-broth也可使用，但轉化效率會有所下降。6. 稀釋時，使用SOC培養基。7. L-broth plate :成份per liter Tryptone10 g Yeast extract5 g NaCl5 g 用1N NaOH調整到pH7.5，添加agar到1.5%，高壓滅菌。8. 不建議將解凍的感受態細胞再次冷凍保存。如果再次凍結不可避免，將細胞置于干冰/乙醇中迅速冷凍，置于-80℃保存。但是，轉化效率可能會降低至少一個數量級。9. 本制品中含有的伴侶蛋白質粒帶有來源于pACYC的復制起點和氯霉素抗性基因 (Cmr)，E.coli表達系統中可以使用常用的ColE1型、具氨芐抗性 (Ampr)篩選標記的表達載體，但不可與含有氯霉素抗性基因的表達質粒共同使用。 |
