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| ■ 制品內容 (25 μl反應×120次量、 各20次×6種) |
| 2X CycleavePCR Reaction Mix (2×conc.)750 μl×2（120 次）Primer·Probe Mix-1 (for beef) (5X conc.)*1100 μl（20 次）Primer·Probe Mix-2 (for pork) (5X conc.)*1100 μl（20 次）Primer·Probe Mix-3 (for chicken) (5X conc.)*1100 μl（20 次）Primer·Probe Mix-4 (for rabbit) (5X conc.)*1100 μl（20 次）Primer·Probe Mix-5 (for horse meat) (5X conc.)*1100 μl（20 次）Primer·Probe Mix-6 (for mutton) (5X conc.)*1100 μl（20 次）dH2O1 mlControl DNA for beef*250 μl（10 次）Control DNA for pork*250 μl（10 次）Control DNA for chicken*250 μl（10 次）Control DNA for rabbit*250 μl（10 次）Control DNA for horse meat*250 μl（10 次）Control DNA for mutton*250 μl（10 次） *1 含有熒光標記探針，要注意避光。。*2 Control DNA為確認反應性能的陽性對照，濃度約為 2 ng/μl。 Limited Use Label License: [M40], [M46], [L4] |
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| ■ 制品說明 |
| CycleavePCR 肉種鑒定Kit (6種) 是以線粒體DNA上Cytochrome C oxidase Subunit I (COX I) 基因區域的動物物種間多態性為基礎，對牛、豬、雞、馬、羊、兔6種肉類進行鑒定，使用Thermal Cycler Dice Real Time System II等Real Time PCR專用儀器進行擴增檢測。PCR法是以微量的DNA為模板，對目的基因進行特異性擴增的技術。由DNA熱變性、引物退火、DNA聚合酶作用下引物的延伸三個步驟循環往復，可以在短時間內擴增DNA達100萬倍以上。使用Real Time PCR專用擴增儀可對擴增產物進行實時監測。本制品中的DNA聚合酶采用了Hot Start PCR專用酶Takara Ex Taq HS，可以在更短時間內進行高靈敏度的檢出，并能有效防止在熱循環前由引物錯配或引物二聚體產生的非特異性擴增。Kit中使用了COX I 區域設計的特異性引物，對各動物物種進行特異性擴增，并使用與各物種擴增產物特異性結合的探針進行檢測。該檢測使用了Cycling Probe法，Cycling Probe法是由RNA和DNA構成的雜合探針與RNase H組合使用的高靈敏度檢出法，能夠高效率地檢出擴增過程中及擴增結束時的目的基因片段。Cycling Probe內部含有RNA堿基，一端標記熒光物質，另一端標記熒光淬滅物質，當探針處于完整狀態時，由于熒光淬滅作用抑制熒光物質發出熒光，但當探針與擴增產物中的互補序列雜交后，RNase H在RNA部分將探針切斷，淬滅抑制作用解除，熒光物質發出熒光，通過測定熒光強度，能夠實時監控擴增產物量。制品中目的基因檢測用探針使用了FAM標記，內參照檢測用探針使用了ROX標記，在同一反應管內對目的基因及內參照 (Internal Control) 同時進行擴增，通過兩種不同熒光標記探針可以對目的基因和內參基因同時檢定，實現雙通道同步檢測。其中，對內參照反應的檢測，可以監控反應是否正常進行，防止假陰性結果的產生。使用Real Time PCR進行檢測，無需電泳便可迅速判定結果 (約80 min) 。 本制品中含有確認PCR擴增反應是否正常的陽性對照用模板、引物和檢出用探針，可確認反應液中有無PCR阻害物。 ■ 保存-20℃。 ■ 操作注意1. Real Time PCR儀的使用請按照說明書進行。2. 如果探針、引物因混入核酸酶而被降解，則不能準確檢測。實驗者的汗液和唾液也可能會帶入核酸酶，操作中應注意。3. 建議從反應液的配制到檢測樣品的添加，設定以下3個實驗區域，并進行物理性隔離（參考“補充：關于區域劃分”）。在各區域要避免開閉含有擴增產物的反應管。區域1：反應液的配制及分裝。區域2：檢測樣品的制備。區域3：向反應液中添加檢測樣品，進行反應、檢出。由于本Kit使用了Real Time PCR的方法，擴增反應與檢測同時進行，反應后的擴增產物無需進行電泳。另外，為了避免污染，嚴禁從Tube中取出擴增產物。 |
