B族溶血性鏈球菌(Streptococcus agalactiae ;GBS)屬于革蘭氏陽性菌,是人泌尿生殖道和腸道的常在菌,新生兒敗血癥及出生后3個月時的腦膜炎、高齡者的侵襲性感染主要是由B族溶血性鏈球菌感染所引起的。通過培養檢測GBS時,存在檢測時間長、檢測靈敏度低等問題。 本制品是以GBS來源的編碼組氨酸激酶的dltS基因為目的基因,使用Real Time PCR儀,可快速對所有GBS進行特異性檢測的試劑盒。 本制品使用了Hot Start法用DNA聚合酶TaKaRa Ex Taq? HS,可以有效地抑制在配制反應液時發生的引物錯配及引物二聚體引起的非特異性PCR擴增。本制品采用Cycling Probe法進行檢測,Cycling Probe法是由RNA和DNA構成的雜合探針與RNase H組合使用的高靈敏度檢出法,能夠高效率地檢出擴增過程中及擴增結束時的目的基因片段。Cycling Probe內部含有RNA堿基,一端標記熒光物質,另一端標記熒光淬滅物質,當探針處于完整狀態時,由于熒光淬滅作用抑制熒光物質發出熒光,但當探針與擴增產物中的互補序列雜交后,RNase H在RNA部分將探針切斷,淬滅抑制作用解除,熒光物質發出熒光。通過測定熒光強度,能夠實時監控擴增產物量。 制品中檢測GBS來源的dltS基因用探針的熒光物質使用了FAM標記,內參照(Internal Control)檢測用探針的熒光物質使用了ROX標記。在同一反應管內可以對GBS的特異性dltS基因及內參照同時進行擴增,通過兩種不同熒光標記的探針可以對dltS基因及內參照同時檢出。其中,對內參照反應的檢測,可以監控反應是否正常進行,防止假陰性結果。本檢測無需電泳,簡單快速。 本制品是與Dr.Kimiko Ubukata,Department of Infectious Diseases,Keio University School of Medicine 聯合研發的。 |