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            產品目錄

            TaKaRa 定點突變操作的試劑盒

            品名: TaKaRa 定點突變操作的試劑盒
            品牌: TaKaRa
            型號: R401
            • 產品詳情
            • 規格參數
            • 商品名稱:TaKaRa MutanBEST Kit

            • 商品編號:SPU2021050590

            • 上架時間:2022-01-04


            ■ 制品內容 (20 次量)
            Pyrobest DNA Polymerase (5 U/μl)15 μl10×Pyrobest Buffer II200 μldNTP Mixture (2.5 mM each)180 μl10×Blunting Kination Buffer50 μlBlunting Kination Enzyme Mix25 μlLigation Solution I*150 μl * Ligation Solution I 即為Ligation Kit Ver.2.1 的一種組份。 

            ■ 制品說明
            本制品是利用PCR技術進行定點突變操作的試劑盒。其原理是利用導入變異點的引物進行PCR反應后,對PCR產物進行末端平滑化及5’磷酸 (P) 化處理,再用高效連接試劑Ligation Solution I進行自身連接 (環化反應),然后轉化、提取突變體DNA。本試劑盒的原理十分簡單,但Taq酶在PCR過程中的錯配率限制了這一技術的應用?,F在,Takara的Pyrobest DNA Polymerase使這一技術得到了很好的發揮。Pyrobest DNA Polymerase不僅具有很高的保真性(Fidelity),并且和TaKaRa Taq具有同樣的擴增效率。與其他突變試劑盒相比,本試劑盒的特點是操作方便、簡單,只需一天時間便可完成整個操作,并且不受載體、宿主菌的限制。 ■ 保存-20℃。 ■ TaKaRa MutanBEST Kit原理試劑盒原理見下圖,全套操作約需5小時,簡單說明如下。1. 設計一對5’端鄰接,3’端方向相反的引物用以導入變異點。2. 進行PCR擴增 (使用高保真DNA聚合酶Pyrobest DNA Polymerase)。3. PCR片段的末端平滑及5’末端磷酸化反應 (在同一反應體系內進行,反應只需10分鐘)。4. 自身連接反應 (使用本試劑盒中的DNA高效連接液Ligation Solution I,連接反應只需30 分鐘至1小時)。5. 質粒DNA轉化,挑選變異體。  
            ■ 注意事項
            1. 當載體與插入的DNA片段的總長度小于5 kb時,使用本試劑盒較為合適;如果載體與插入DNA 片段長度太長時,不推薦使用本試劑盒。
            2. PCR反應后的DNA片段應進行切膠回收純化,然后再進行自身連接反應,這樣可以提高突變成功率。
            3. Ligation Solution I請于冰中融解,使用前混勻。應避免多次反復凍融。
            4. 連接轉化效率低時,請試用下述方法進行改進。
            ① 確認感受態細胞的轉化效率。
            ② 延長連接反應時間至過夜反應。


            TaKaRaMutanBESTKit
            品牌CodeNo.產品名稱包裝量
            TakaraR401TaKaRaMutanBESTKit20次


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