TaKaRa PrimeScript? 一步法RT-PCR定性檢測試劑盒
- 品名: TaKaRa PrimeScript? 一步法RT-PCR定性檢測試劑盒
- 品牌: TaKaRa
- 型號: RR055B
- 產品詳情
- 規格參數
商品名稱:PrimeScript One Step RT-PCR Kit Ver.2
商品編號:SPU2021050492
上架時間:2022-09-27
■ 制品內容 (Code No.: RR055A) |
PrimeScript 1 Step Enzyme Mix100 μl2 × 1 Step Buffer625 μl ×2Control F-1 Primer (20 μM)*120 μlControl R-1 Primer (20 μM)*220 μlPositive Control RNA (2×105 copies/μl)20 μlRNase Free dH2O625 μl ×2 *1 Positive Control RNA用上游引物。*2 Positive Control RNA用下游引物。 |
■ 制品說明 |
PCR (Polymerase Chain Reaction;聚合酶鏈式反應) 是一種體外擴增DNA的簡單而有效的方法。雖然原理上PCR法是擴增DNA,RNA不能直接被擴增,但是經過反轉錄酶的作用把RNA反轉錄成cDNA后,PCR法便可應用于RNA的解析了。目前,RT-PCR方法已廣泛應用于RNA的構造解析、cDNA的克隆及RNA水平上的表達解析等多種領域。本試劑盒采用了一步 (One Step) RT-PCR法。RNA→cDNA→PCR反應操作在同一反應體系中連續進行,反應中途不需添加任何試劑,降低污染風險。反轉錄反應使用了Takara Bio公司特別開發的新型反轉錄酶PrimeScript RTase。該反轉錄酶對具有復雜二級結構的RNA模板也具有很強的延伸能力;PCR反應使用了擴增性能優越的Hot Start型DNA聚合酶TaKaRa Ex Taq? HS,大大提高了本試劑盒的擴增性能和反應特異性。在本試劑盒中,已將PrimeScript RTase、TaKaRa Ex Taq HS、RNase Inhibitor以及One Step RT-PCR用穩定劑等配制成了Premix型的PrimeScript 1 step Enzyme Mix;同時把反應用Buffer、dNTP以及One Step Enhancer Solution配制成了Premix型的2×1 Step Buffer的形式,使實驗操作時的反應液配制更為簡單方便。使用本試劑盒可進行高效的RT-PCR擴增。反轉錄溫度可以設定為50℃,能夠有效抑制非特異性擴增。另外,本試劑盒可減少由于錯配和引物二聚體造成的非特異性反應。本試劑盒中含有進行One Step RT-PCR反應用的全部試劑,可以方便有效地對RNA進行擴增分析。 |
■ 各種引物的序列 |
引物名稱各引物序列Control F-1 Primer 5′-CTGCTCGCTTCGCTACTTGGA-3′Control R-1 Primer 5′-CGGCACCTGTCCTACGAGTTG-3′ |
■ 原 理 |
PrimeScript One Step RT-PCR Kit Ver.2可在同一反應管中連續進行由PrimeScript RTase將RNA反轉錄為cDNA,再由TaKaRa Ex Taq HS擴增此cDNA的RT-PCR反應。 |
圖1. PrimeScript One Step RT-PCR Kit Ver.2原理圖 |
■ 保存 |
-20℃。 |
■ 注意事項 |
1. 當同時需要進行數次RT-PCR反應時,應先配制至少10次量各種試劑的混合液,然后再分裝到每個反應管中。這樣,可使所取的試劑體積更準確,減少試劑損失,避免重復分取同一試劑。同時也可以減少實驗操作或實驗之間產生的誤差。 |
2. 使用PrimeScript 1 Step Enzyme Mix時,應輕輕混勻,避免起泡;分取之前要小心地離心收集到反應管底部;由于酶保存液中含有50%的甘油,粘度高,分取時應慢慢吸取。 |
3. 2×1 Step Buffer使用前用vortex充分混勻,離心后使用。 4. 酶制品應在實驗前才從-20℃中取出,使用后也應立即放回-20℃中保存。 5. 為了防止Positive Control RNA分解,應盡量避免反復凍融。有條件的實驗室最好保存于-70℃~-80℃。 6. 分裝試劑時務必使用新的槍頭,以防止樣品間污染。 7. 使用本試劑盒進行反轉錄反應時必須使用特異性的反轉錄引物,Random Primer、Oligo dT Primer不能使用。 |
PrimeScript?OneStepRT-PCRKitVer.2 | |||
品牌 | CodeNo. | 產品名稱 | 包裝量 |
Takara | RR055A | PrimeScript?OneStepRT-PCRKitVer.2 | 50次 |
Takara | RR055B(A×4) | PrimeScript?OneStepRT-PCRKitVer.2 | 200次 |
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